[크로마토그래피] chromatography 정제 순서
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작성일 23-02-02 22:27본문
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◆ chromatography 정제 순서 입니다.(waxhing 작업은 먼저 평형시 썼던 buffer로 다시 평형을 맞추고 그 뒤, 알코올을 채운다)
① 50mM Tris-HCl(pH7.5) 200mM NaCl이나 PBS buffer로 column의 불순물을 씻겨내고, UV MONITOR에 의해 나타나는 그래프가 평형(일직선으로 감)이 되게 한다
※ recorder의 peak의 해석방법
⑧ SDS-PAGE에 의한 fraction의 찾으려는 단백질의 확인은 NCBI나 Expasy에서 그 단백질의 무게를 확인한뒤 마커와 fraction이 나온 band의 위치를 비교하면서 확인
설명
④ 측정(measurement)된 단백질이 든 sup.은 monitor의 다른 부분에서 빠져나가며 이 것을 recorder의 그래프의 peak를 보고 collection한다.
◆ chromatography 정제 순서
⑦ column에 남은 찌꺼기에 의한 미생물 번식을 방지하고자 30%으로 희석한 에탄올을 넣는다. 목차
- 20mM Imidazole을 넣어 column내의 ligand와 붙어 있는 단백질 부분을 용출(elusion)한다. 그림과 정제순서를 잘 나타내고있으며 교수님께 칭찬받은 레포트입니다.
순서
⑤ 각각의 받은 sup.을 fraction이라 하며 fraction을 받은 tube에는 라벨링을 필수 적으로 해준다.
ㅁ. 아미노산 조성분(成分)석
[크로마토그래피] chromatography 정제 순서
◆ chromatography 정제 순서 입니다.
3) 농축
ㄱ. 단백질 정량
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③ column에 있던 buffer의 색깔이 노랗게 되며(sup. 때문) 이 sup.은 UV Monitor를 지나면서 UV에 의해 단백질의 용출(elution)을 측정(measurement)된다
ㄷ. 생물활성의 측정(measurement)
4) Gel chromatography
- 이런 식으로 50mM, 100mM, 200mM로 농도를 점점 올려서 ligand에 binding하고 있는 단백질을 모두 거둬낸다.
- unbound ; column내의 ligand와 친화력이 없는 찌꺼기나 불순물(상등액+평형잡았던 buffer)
Affinity chromatography ⇒ SDS-PAGE확인 ⇒ Ion exchange chromatography ⇒ SDS-PAGE확인 ⇒ 농축 ⇒ Gel chramatography ⇒ SDS-PAGE확인 ⇒ final 농축
1) Affinity chromatography ; 다른 chromatography에 비해 높은 정제효율과 회수율을 가지고 단 한번에 많은 양의 시료 처리가 가능
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ㅂ. 아미노산 배열 결정
ㄹ. 면역학적 동종
◆ chromatography 정제 순서
ㄴ. 전기영동
2) Ion exchange chromatography
다. ; sup의 친화력이 20mM 주입시 낮다면 fraction으로 떨어져 나올수 있음
② recorder에 평형이 맞추어지면, buffer에 있던 노즐을 파쇄하여 얻은 상등액(sup.)이 든 tube에 넣고 sup을 column에 흘려보낸다.
⑥ sup.의 종류
◈ 정제순서
1) Affinity chromatography
그림과 정제순서를 잘 나타내고있으며 교수님께 칭찬받은 리포트입니다.